摘要 VectorBuilder宣布已开发出高稳定性的MuteFree™ AAV载体，以解决基因治疗开发中AAV载体ITR串行不稳定的挑战。MuteFree™ AAV载体兼容于标准的制造工作流程以及常见的大肠杆菌菌株，并能降低病毒产量与基因表现效果的变异。借由采用这项技术，将提升基因药物开发的可靠性，维持从研究到临床制造的一致性。介绍此技术的论文已于bioRxiv上公开，且研究成果也预计在美国ASGCT年会上发表。 芝加哥（2026年4月14日） — 带领基因递送技术及CDMO解决方案领域的全球领导者VectorBuilder，于今日发表了旨在改善基因治疗开发中主要研究挑战之一「ITR串行不稳定性」而设计的高稳定性AAV载体「MuteFree™ AAV」。关于本技术的研究论文已发表于预印本服务器bioRxiv上。 腺相关病毒（AAV）是目前基因治疗开发中最常被活用的基因递送载体。然而另一方面，制造批量间的不均一性与治疗效果的差异等问题，成为了临床开发与实用化的重大障碍。其中一个主要因素就是影响病毒基因组包装及转殖基因表现成败的AAV载体反向末端重复串行（ITR）的不稳定性。 图1. 针对从研究机构或产业界的合作伙伴处接收的300多种AAV质体载体之ITR进行了桑格定序（Sanger sequencing）。这些质体DNA载体在接收时已通过了利用限制酶消化的品质管理（QC）检测。串行分析结果显示，约40%的AAV转移载体ITR发生了碱基串行的突变（Nucleic Acids Res. 2025. doi: 10.1093/nar/gkaf697）。 VectorBuilder独自分析了从世界各地的学术机构及产业界实验室所收集的数百种AAV质体载体，结果发现约40%的ITR串行中存在碱基突变（Bai et al., Nucleic Acid research. 2025 Jul 19;53(14) doi: 10.1093/nar/gkaf697）。已知ITR串行的不完整会直接影响病毒的包装效率以及所递送之基因的表现水准。因此，这显示了ITR串行的突变会导致病毒产量下降、制造流程不均一，甚至降低基因治疗效果的再现性。在某些情况下，为了获得足够的治疗效果，需要投予更高剂量的病毒，这也产生了制造成本增加及因高剂量投予而提高毒性风险等新的挑战。 为改善ITR串行的不稳定性，过去也尝试过各种方法。例如使用特殊的大肠杆菌菌株、借由调整大肠杆菌培养条件来控制质体DNA的增幅行为，或是直接修改ITR串行本身的方法等。这些努力在降低ITR突变率上展现了一定效果，但另一方面却容易导致质体DNA制造流程复杂化，且依然未能达到充分提升质体稳定性或本质上改善病毒产量之目的。 为克服这些传统方法的极限所开发出来的便是MuteFree™。高度优化的MuteFree™ AAV载体系统，在维持ITR串行高度完整性的同时，实现了与通用大肠杆菌菌株及标准制造工作流程的高度兼容性。其结果是，在无须变更现有制造管线的情况下，能实现稳定性更高且再现性优异的AAV制造，强力支持从研究开发到扩大制造规模的各个阶段。 图2. 借由转换至MuteFree™ AAV，在大肠杆菌中进行10代连续继代培养（超过160次的群体倍增）后，单股AAV（ssAAV）的ITR串行碱基突变率由48.1%降至0%，自我互补AAV（scAAV）则由31.8%降至0%。ITR串行是通过桑格定序进行分析。